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    抗体药物生产公司生物原代细胞的培养方法

    放大字体  缩小字体 发布日期:2023-09-20 00:05:28    浏览次数:6    评论:0
    导读

    原代细胞的培养,也叫初代培养,是从供体取得组织细胞在体外进行的培养,是建立细胞系的第一步,是一项基本技术。 抗体药物生产公司原代细胞的培养方法一般有以下4种: ① 组织块培养法 组织块培养是常用、简便易行和成功率较高的原代培养方法。其基本方法是将剪成的小组织团块接种于培养瓶(或皿)中,瓶壁可预先涂以胶原薄

    原代细胞的培养,也叫初代培养,是从供体取得组织细胞在体外进行的培养,是建立细胞系的第一步,是一项基本技术。
    抗体药物生产公司原代细胞的培养方法一般有以下4种:
    ① 组织块培养法
    组织块培养是常用、简便易行和成功率较高的原代培养方法。其基本方法是将剪成的小组织团块接种于培养瓶(或皿)中,瓶壁可预先涂以胶原薄层,以利于组织块粘着于瓶壁,使周边细胞能沿瓶壁向外生长。
    ② 消化培养法
    ③ 悬浮细胞培养法
    对于悬浮生长的细胞,如白血病细胞、淋巴细胞、骨髓细胞、胸水和腹水中的癌细胞和免疫细胞无需消化,可采用低速离心分离,直接培养,或经淋巴细胞分层液分离后接种培养。
    ④器官培养
    器官培养是指从供体取得器官或组织块后,不进行组织分离而直接在体外的特定环境条件下培养,器官培养可保持器官组织的相对完整性,可用于重点观察细胞间的联系、排列情况和相互影响,以及局部环境的生物调节作用。
    原代细胞的培养条件:
    一、静置贴壁细胞(包括半贴壁细胞的培养)培养
    1、细胞要通过充分漂洗,以尽量除去消化液的毒性;
    2、细胞接种时浓度要稍大一些,至少为5×108细胞/L;
    3、 胎牛血清浓度为10%-80%;
    4、应在37℃5% CO2的培养箱中培养;
    5、在起始的2天中尽量减少振荡,以防止刚贴壁的细胞发生脱落,漂浮;
    6、待细胞基本贴壁伸展并逐渐形成网状,应将原代细胞换液;
    7、用骨髓或外周血中的悬浮细胞经静置培养1周时,应将细胞悬液经低速离心后换液。
    二、悬浮细胞培养
    1、原代培养时要尽量去除红细胞;
    2、短期培养,可在含10%小牛血清的RPMI1640培养基中进行;
    3、细胞浓度可在4-6X105/ml范围内,进行分瓶试验;
    4、长期培养时,淋巴细胞中要加入生长因子,白血病细胞中要加入少量的原患者血清,以利细胞生长;
    5、细胞换液一般每隔3天需半量换液一次;
    6、细胞传代一般待细胞增殖加快、细胞密度较高时才能进行。
     
    (文/小编)
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